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產(chǎn)品名稱(chēng):人白細胞介素2 ELISA試劑盒

產(chǎn)品型號:SEKH-0008

產(chǎn)品報價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):人白細胞介素2 ELISA試劑盒可用于檢測人血清/血漿/細胞培養上清中白細胞介素2的含量,達到定量分析,從而檢測其中的含量,用于后續研究和科學(xué)分析。
索萊寶ELISA試劑盒的優(yōu)勢:
1,包被的酶標板單板可拆(能拆分成12個(gè)8孔的酶標條)
2,提供免費代測代檢服務(wù),代出實(shí)驗數據
3,發(fā)文章高獎勵
4,磁鐵可吸附式包裝盒,包裝精美耐用

免費咨詢(xún):010-50973130

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SEKH-0008人白細胞介素2 ELISA試劑盒的詳細資料:

中文名稱(chēng)人白細胞介素2檢測試劑盒
英文名稱(chēng)Human IL-2 ELISA KIT
ReactivityHuman
Sample typeSerum, plasma, Cell culture supernatant
Sensitivity7 pg/ml
Detection TargetIL-2
ApplicationsSandwich ELISA

For research use only. Not for use in diagnostic procedures.

MANUFACTURED AND DISTRIBUTED BY:

CountryCompany: ChinaBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd

Address: NO.8, Liandong U Valley, Tongzhou District, Beijing, P.R.China.

TABLE OF CONTENTS SECTION

人白細胞介素2 ELISA試劑盒?

人白細胞介素-2 ELISA 試劑盒
產(chǎn)品編號:SEKH-0008
適用于人血清、血漿或細胞培養上清液等樣本

人白細胞介素2 ELISA試劑盒

 


 

 

 

背景介紹:
     白細胞介素 2(IL-2)是一種在機體免疫應答中扮演重中之重角色的多效性細胞因子。其于 1976 年被 Morgan 在小鼠脾細胞培養上清中發(fā)現,由于它能很好地促進(jìn)和維持 T 細胞長(cháng)期培養, 故將其稱(chēng)之為為 T 細胞生長(cháng) 因子,1979 年統一命名為 IL-2。人 IL-2 含有 133 個(gè)氨基酸殘基,分子量為 15.5kDa。IL-2 重要的作用是 誘導 T 淋巴細胞增殖和分化,此外,IL-2 還可調節多種細胞的免疫應答。在體內,IL-2 有抗腫瘤、抗微生 物感染、引起移植排斥和自身免疫以及免疫調節等作用。

 

檢測原理:
      Solarbio  ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗人 IL-2 單克 隆抗體包被在酶標板上;分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本,標準品和樣本中的人 IL-2 會(huì )與酶標 板上的包被抗體充分結合;洗板后加入生物素化抗人 IL-2 抗體,該抗體會(huì )與板子上包被抗體捕獲的標準品 和樣本中的人 IL-2 發(fā)生特異性結合;洗板后加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素,生物素與鏈 霉親和素會(huì )發(fā)生高強度的非共價(jià)結合;洗板后加入顯色劑底物 TMB,若反應孔中樣品存在不同濃度的人 IL-2,則 HRP 會(huì )使無(wú)色 TMB 變成不同深淺(正相關(guān))的藍色物質(zhì),加入終止液后反應孔會(huì )變成黃色;后, 在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應孔樣品吸光度(OD),樣本中的人 IL-2 濃度與 OD 成正比,通 過(guò)繪制標準曲線(xiàn)和四參數擬合軟件便可計算出樣本中人 IL-2 的濃度。

 

原理圖:

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注意事項:
1. 試劑盒應在有效期內使用,請不要使用過(guò)期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應保存在 2-8℃冰箱,已復溶但未用完的標準品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測,且加入試劑的順序應保持*。
5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜(※)及潔凈塑料容器。

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少,在運輸過(guò)程中微量液體會(huì )沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來(lái)源試劑盒內含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結果準確,每次檢測均需做標準曲線(xiàn)。

 

安全提示:
試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時(shí)請帶上手套并注意防護;在操作過(guò)程中也要避免試
劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時(shí),請按國家生物
實(shí)驗室安全防護有關(guān)管理規定執行。

 

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自備實(shí)驗器材(不提供,可代購)
1. 酶標儀(主波長(cháng) 450nm,參考波長(cháng) 630nm)
2. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板機或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 雙蒸水,去離子水,量筒等
6. 稀釋用聚丙烯試管

 


樣本收集及儲存:
1. 細胞培養上清:
將細胞培養基移無(wú)菌離心管,在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存(24 小時(shí)內檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復凍融。
2. 血清樣本:
室溫血液自然凝固 20 min 后,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于
-20℃下保存(24 小時(shí)內檢測可放入 2-8℃儲存),保存過(guò)程中如有沉淀,請再次離心,避免反復凍融。
3. 血漿樣本:
將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據標本的實(shí)際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 20 min ,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24小時(shí)內檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復凍融。
※注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結果;如果樣本中的靶標物檢測濃度高
于標準品的值,請將樣品做適當倍數稀釋后檢測,建議正式實(shí)驗前做預實(shí)驗以確定稀釋倍數。

 

 

試劑準備:
1. 試劑回溫:先在實(shí)驗前 30 min 將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現結晶,請放入
37℃溫浴直到結晶全部溶解。
2. 配制洗滌液:預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應用液,未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標準品梯度稀釋?zhuān)杭尤霕藴势?樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標準品中,靜置15分鐘待其*溶解后輕 輕混勻(濃度為1000pg/ml),然后按照以下濃度:250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.9 pg/ml進(jìn)行稀 釋。復溶過(guò)的標準品原液(1000pg/ml)未用完的應廢棄或根據需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~ -80℃冰箱,具體如下圖。

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4. 生物素化抗體工作液:預先計算好試驗所需用量,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍

應用工作液(稀釋前充分混勻),請在30分鐘內加入到反應孔中。

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5. 酶結合物工作液:按每次試驗所需用量配制,用酶結合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結合物稀釋成1 倍應用工作液(稀釋前離心),請在30分鐘內使用。

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6. 洗滌方法: 

自動(dòng)洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為 300ul/孔,注 與吸出間隔為 30 秒,洗板 5 次。 

手工洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,靜止 30 秒后甩 凈酶標板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板 5 次。

 

結果判斷:

1.用酶標儀 450 nm 波長(cháng)測定 OD 值。選擇雙波長(cháng)檢測,參考波長(cháng)為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長(cháng)檢測,請 用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。

2.計算標準品、樣品的平均 OD 值:每個(gè)標準品和標本的 OD 值應減去零孔的 OD 值

3.以標準品濃度為橫坐標,吸光度OD值為縱坐標,用軟件繪制標準曲線(xiàn),樣品中IL-2含量可通過(guò)對應OD 值由標準曲線(xiàn)換算出相應的濃度。

4.若標本 OD 值高于標準曲線(xiàn)上限,應做適當稀釋后重新檢測,計算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數。

 

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1. 數據及標準曲線(xiàn)

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本圖僅供參考,應以當次試驗標準品繪制的標準曲線(xiàn)計算人 IL-2 的樣本含量

 

2. 靈敏度:
低可檢測人 IL-2 濃度達 2pg/ml,
20 個(gè)零標準品濃度 OD 的平均值加上兩個(gè)標準差,計算相應的可檢測濃度。


3. 特異性:

不與人 IL-2、4、6、8、10 反應,小鼠 IL-2、4、6、8 等反應。

 

4. 重復性:
板內,板間變異系數<10%。


5. 回收率:
在選取的健康人血漿、細胞培養上清中加入 3 個(gè)不同濃度水平的人 IL-2,計算回收率。

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6. 線(xiàn)性稀釋?zhuān)?/strong>

分別在選取的 4 份健康人血漿和細胞培養上清中加入高濃度人 IL-2,在標準曲線(xiàn)動(dòng)力學(xué)范圍內進(jìn)行稀 釋?zhuān)u估線(xiàn)性。

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