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產(chǎn)品名稱(chēng):ATP含量檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品型號:BC0305

產(chǎn)品報價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):ATP含量檢測試劑盒 微量法
測定意義:ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數。測定ATP含量并且計算能荷,
2、蛋白質(zhì)含量 3.5%~5.0%( w/v)

3、血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)

4、無(wú)菌檢驗  陰性

5、支原體檢驗  陰性

6、細菌內毒素 ≤5(EU/ml)

7、牛腹瀉病毒 陰

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BC0305ATP含量檢測試劑盒 微量法的詳細資料:

ATP含量檢測試劑盒 微量法

ATP 含量檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法

產(chǎn)地:北京市通州區馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓
英文名稱(chēng):ATP content detection kit
產(chǎn)品商標:solarbio

注意:正式測定前務(wù)必取2-3 個(gè)預期差異較大的樣本做預測定。
貨號:BC0305
規格:100T/96S
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存;            
參考價(jià)格:1560
庫存狀態(tài):現貨
關(guān)鍵詞:ATP含量檢測|ATP含量|ATP|

產(chǎn)品內容:
提取液:液體100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體20mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入3.5mL 蒸餾水充分溶解,可加熱促進(jìn)溶解;
試劑三:液體4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前每支加入0.4mL 蒸餾水溶解,可分裝后-20℃保存,避免反復凍融;
試劑五:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入1mL 蒸餾水;
試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入0.5mL 蒸餾水備用,可分裝后-20℃保存,避免反復凍融;
標準品:粉劑×1 支,-20℃保存。5mg ATP,臨用前加入0.826mL 蒸餾水配成10μmol/mL 的ATP標準溶液。

產(chǎn)品說(shuō)明:
ATP 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數。測定ATP 含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。
HK 催化葡萄糖和ATP 合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH,NADPH 在340nm 有特征吸收峰,NADPH 和ATP 含量成正比,以此反應ATP 含量。

自備儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液槍、微量石英比色皿/ 96 孔UV 板、研缽/勻漿器、蒸餾水和lv仿。

操作步驟:
一、ATP 的提?。?/span>
1、血清(漿)中ATP 的提?。喊凑昭澹{)體積(mL):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議取約0.1mL 血清(漿),加入1mL 提取液),充分震蕩,10000g,4℃離心10min;取上清液另一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心3min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。

2、組織中ATP 的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清另一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心3min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。
3、細胞或細菌中ATP 的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬(wàn)細菌或細胞加入1mL 提取液),超聲波破碎1min(冰浴,強度20%或200W,超聲2s,停1s),10000g 4 ℃離心10min;取上清液另一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心3min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質(zhì)含量測定)。

二、測定步驟:
1、紫外分光光度計/酶標儀預熱30 min 以上,調節波長(cháng)到340nm,蒸餾水調零。
2、將10μmol/mL 的ATP 標準溶液用蒸餾水稀釋16 倍即0.625 μmol/mL 標準溶液備用。
3、工作液的配制:臨用前請按試劑二(mL):試劑三(mL):試劑四(mL):試劑五(mL):試劑六(mL)=1:1:0.1:0.4:0.1 的比例配制,現配現用。
4、加樣表
在微量石英比色皿或96 孔UV 板中加入:
試劑名稱(chēng)(μL)          測定管          標準管
樣本                   20
標準液                                 20
試劑一                128             128
工作液                 52              52

充分混合后,立即測定340nm 下10s 的吸光值A1,然后將比色皿連同反應液一起放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)水浴中反應3min,拿出擦拭干凈立即測定其在3min10s 時(shí)的吸光值A2。用96 孔板則放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)培養箱中(酶標儀若自帶控溫功能,則將溫度調37℃或25℃)。分別計算ΔA 測定=A2 測定管-A1 測定管,ΔA 標準=A2標準管-A1 標準管

三、ATP 含量計算:
1、血清(漿)中ATP 含量計算
ATP 含量(μmol/mL) =ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準)×(V 提取+V 血清(漿))÷V 血清(漿)=6.875×ΔA 測定÷ΔA 標準
2、組織、細菌或細胞中ATP 含量計算
1) 按樣本鮮重計算
ATP 含量(μmol/g 鮮重)= ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準)×V 提取÷W=0.625×ΔA 測定÷ΔA 標準÷W
2) 按細菌或細胞密度計算
ATP 含量(μmol/106 cell)=ΔA 測定÷(ΔA 標準÷C 標準)×V 提取÷5=0.125×ΔA 測定÷ΔA 標準

C 標準管:標準液濃度,0.625μmol/mL;
V 提?。杭尤氲奶崛∫后w積,1mL;
V 血清(血漿):血清(漿)體積,0.1mL;
W:樣本質(zhì)量,g;
5:細胞或細菌總數,5×106 個(gè)。

注意事項
1、加入提取液離心后的上清若為渾濁為正?,F象。
2、提取過(guò)程嚴格在冰浴條件下進(jìn)行。
3、用微量石英比色皿測量的吸光值大于1.4 或者ΔA 測定大于1.2 時(shí)(石英96 孔板的吸光值大于1.4 或者ΔA 測定大于1.2 時(shí)),可以將樣品稀釋后進(jìn)行測定。若吸光值小于0.01,則可以增加反應時(shí)間(5min 或10min)來(lái)測定,標準品需要增加同樣的反應時(shí)間。

相關(guān)文獻:

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death & Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury》 作者:Yang Wang,Jianhang Jiao,Shanyong Zhang,Changjun Zheng,Minfei Wu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:31146112
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448

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