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產(chǎn)品名稱(chēng):細胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI

產(chǎn)品型號:CA1020-20

產(chǎn)品報價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):細胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI
是一種核酸染料,它不能穿透完整細胞膜,但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透,并使細胞核紅染

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CA1020-20細胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI的詳細資料:

細胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI 

貨號: CA1020
規格: 20T/50T/100T
保存:貯存于 2-8°C,復檢期為一年。建議 Annexin V-FITC 打開(kāi)后,分裝成小份凍存于-20°C。
產(chǎn)品說(shuō)明:細胞凋亡是細胞的基本特征之一,在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內環(huán)境的穩定等方面都起到十分重要
的作用。 Annexin V 是一種分子量為 35.8 KD 的 Ca2+
依賴(lài)性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過(guò)程中翻轉到膜外的
磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)高親和力特異結合。FITC-Annexin V 結合到凋亡細胞后,在藍色光的
激發(fā)下,發(fā)出綠色熒光,區分出凋亡細胞與正常細胞。碘化丙啶(Propidium  iodide,PI)是一種核酸染料,
它不能穿透完整細胞膜,但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透,并使細胞核紅染。將
FITC-Annexin V 與 PI 匹配使用,可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞區分開(kāi)來(lái)。
細胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI操作步驟: 
 1.  調整待測細胞的濃度為 5×10五次方-1×10六次方個(gè)/ml。
 2.  取 1ml 細胞,1000rpm,4℃離心 10 分鐘,棄上清。
 3.  加入 1ml 預冷的 PBS,輕輕震蕩使細胞懸浮,1000rpm,4℃離心 10 分鐘,棄上清(對于貼壁細胞,先用胰酶消化,再用 PBS 洗滌)。
 4.  重復步驟 3 兩次。
 5.  將細胞重懸于 200µl Binding Buffer。
 6.  加入 10µl Annexin V-FITC 和 10µl PI,輕輕混勻,避光室溫反應 15 分鐘  或 4℃反應 30  分鐘。
 7.  加入 300µl Binding Buffer,在 1 小時(shí)內用流式細胞儀檢測。
 8.  若用熒光顯微鏡檢測,將細胞混合液離心,取細胞沉淀涂片,再進(jìn)行觀(guān)察。
注意事項:  : :  : 
為保證得到理想的實(shí)驗結果在使用此試劑盒之前請認真閱讀該注意事項。
 1.旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
 2.Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質(zhì),在保存與操作時(shí)請注意避光。
 3.Propidium iodide(PI)能通過(guò)皮膚吸收,對眼睛有刺激作用。
 4.在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免 PBS 殘留影響實(shí)驗結果。
 5.PI 染色時(shí)間過(guò)長(cháng)有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議行 Annexin V-FITC 染色,上機前 5 分鐘再
加入 PI 染色。
產(chǎn)品內容: :: :  CA1020-20  CA1020-50  CA1020-100
Annexin V-FITC  200µl  500µl  1000µl
Binding   Buffer  12ml  30ml  60ml
Propidium iodide(PI)  200µl  500µl  1000µl
 6.整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在 4℃下操作。
 7.反應完畢后請盡快檢測,因為細胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程,反應 1 小時(shí)后熒光強度就開(kāi)始衰變。
 8.成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響,如細胞類(lèi)型、細胞膜上 PS 的密度、發(fā)生凋亡時(shí) PS 翻轉的比
例、誘導細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導凋亡的時(shí)間等,把這些影響因素進(jìn)行優(yōu)化對實(shí)驗成功是非常必要
的。
此試劑盒僅供科研使用。


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